ہمارے اردگرد بہت سے ایسے ہیرو ہیں جو بظاہر عام نظر آتے ہیں لیکن حقیقت میں وہ خاموشی سے ہمارے لیے بہت کچھ کرتے ہیں۔Proteinase K مالیکیولر ڈائیگنوسٹک انڈسٹری میں ایک "نا سنا ہیرو" ہے، حالانکہ انڈسٹری میں "بڑے اور طاقتور" کے مقابلے میں، proteinase K اس قدر کم ہے کہ ہم نے طویل عرصے سے اس کی اہمیت کو نظر انداز کیا ہے۔نئی کراؤن کی وبا کے پھیلنے کے ساتھ ہی، proteinase K کی مانگ بڑھ گئی ہے، اور اندرون و بیرون ملک سپلائی کھپت سے بہت پیچھے ہے، اور سب کو اچانک احساس ہوا کہ proteinase K بہت اہم ہے۔
پروٹیناس K کا استعمال کیا ہے؟
Proteinase K ایک سیرین پروٹیز ہے جس میں پروٹولیٹک انزائم سرگرمی ہوتی ہے اور ماحول کی ایک وسیع رینج (pH (4-12.5)، زیادہ نمک والے بفر، 70 °C کے اعلی درجہ حرارت وغیرہ میں سرگرمی برقرار رکھ سکتی ہے۔مزید برآں، SDS، یوریا، EDTA، guanidine hydrochloride، guanidine isothiocyanate، وغیرہ کے ذریعے proteinase K کی سرگرمی کو روکا نہیں جاتا، اور صابن کی ایک خاص مقدار بھی proteinase K کی سرگرمی کو بڑھا سکتی ہے۔ طبی علاج میں (وائرس اور مائکروبیل ڈس انفیکشن )، کھانا (گوشت کا ٹینڈرائزیشن)، چمڑا (بالوں کو نرم کرنا)، وائن میکنگ (الکحل کی وضاحت)، امینو ایسڈ کی تیاری (ڈیگریڈ پنکھ)، نیوکلک ایسڈ نکالنا، سیٹو ہائبرڈائزیشن میں، وغیرہ، پروٹینیز کے ایپلی کیشنز ہیں۔سب سے زیادہ استعمال ہونے والی ایپلی کیشن نیوکلک ایسڈ نکالنا ہے۔
Proteinase K نمونے میں موجود تمام قسم کے پروٹینوں کو انزائیمولائز کر سکتا ہے، بشمول وہ ہسٹون جو نیوکلک ایسڈز کے ساتھ مضبوطی سے جکڑے ہوئے ہیں، تاکہ نیوکلک ایسڈز کو نمونے سے نکال کر نچوڑ میں چھوڑا جا سکے، جس سے نکالنے اور صاف کرنے کے اگلے مرحلے میں سہولت ہو۔وائرل نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے میں، پروٹینیس K وائرس کے نمونے لینے کے حل میں ایک اہم جز ہے۔Proteinase K وائرس کے کوٹ پروٹین کو کریک اور غیر فعال کر سکتا ہے، جو نقل و حمل اور پتہ لگانے کے مرحلے کے دوران زیادہ محفوظ ہے۔اس کے علاوہ، proteinase K بھی تنزلی کر سکتا ہے RNase وائرل RNA کے انحطاط کو روکتا ہے اور نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے میں سہولت فراہم کرتا ہے۔
پروٹینیز کے کی راتوں رات شہرت
چاہے سائنسی تحقیق کے میدان میں ہو یا IVD کے میدان میں، نیوکلک ایسڈ نکالنا سب سے بنیادی تجربہ ہے، اس لیے proteinase K ہمیشہ سے ایک بہت اہم وجود رہا ہے۔تاہم، ماضی میں، proteinase K اس کے کردار سے کہیں کم معروف تھا۔اس کا ایک بڑا حصہ یہ تھا کہ پروٹیناس K کی طلب اور رسد کا رشتہ بہت مستحکم تھا۔بہت کم لوگ سوچیں گے کہ پروٹینیز K کی فراہمی ایک مسئلہ ہو گی۔
نئی کراؤن وبا کے پھیلنے کے ساتھ، نیوکلک ایسڈ ٹیسٹنگ کی مانگ میں اضافہ ہوا ہے۔جون 2020 کے آخر تک، چین نے تقریباً 90 ملین نئے کراؤن ٹیسٹ مکمل کیے ہیں، اور یہ تعداد عالمی سطح پر اور بھی تشویشناک ہے۔نیوکلک ایسڈ نکالنے کے تجربات میں، پروٹینیز K کا کام کرنے والا ارتکاز تقریباً 50-200 μg/mL ہے۔عام طور پر، نیوکلک ایسڈ کا نمونہ نکالنے میں تقریباً 100 μg پروٹینیز K کا وقت لگتا ہے۔اصل استعمال میں، نیوکلک ایسڈ نکالنے کی کارکردگی کو بڑھانے کے لیے، اکثر Proteinase K کو زیادہ مقدار میں استعمال کیا جائے گا۔نئے کورونا وائرس کے نیوکلک ایسڈ کا پتہ لگانے سے بڑی مقدار میں پروٹینیز K کی طلب سامنے آئی ہے۔پروٹینیز K کا اصل سپلائی اور ڈیمانڈ کا توازن تیزی سے ٹوٹ گیا، اور پروٹینیز K راتوں رات وبائی امراض سے بچاؤ کا ایک اہم مواد بن گیا۔
پروٹینیس K کی پیداوار میں مشکلات
اگرچہ اس وبا کی نشوونما کے ساتھ لوگوں نے پروٹیناس K کی اہم قدر کی قدر کی ہے، لیکن یہ شرمناک بات ہے کہ پروٹینیز K کی ضرورت سے زیادہ کم کلید کی وجہ سے، چند ملکی کمپنیاں پروٹینیز K کی تیاری میں ملوث رہی ہیں۔ جب لوگ پروٹینیز K کی پیداوار کو قائم کرنا چاہتے ہیں پیداوار کے عمل کے دوران، یہ پتہ چلا کہ proteinase K ایک انتہائی خاص پروٹین ہے۔قلیل مدت میں پروٹینیس کے کی پیداواری صلاحیت کو بڑھانا انتہائی مشکل ہے۔
پروٹیناس K کی بڑے پیمانے پر پیداوار کو درج ذیل مشکلات کا سامنا ہے۔
1. کم اظہار
Proteinase K غیر خاص طور پر زیادہ تر پروٹین کو کم کر سکتا ہے اور ایکسپریشن ہوسٹ سیل کو شدید زہریلا بنا سکتا ہے۔لہذا، پروٹینیس K کے اظہار کی سطح عام طور پر بہت کم ہوتی ہے۔اظہار کے نظاموں اور تناؤ کی اسکریننگ جو پروٹینیس K کا انتہائی اظہار کرتے ہیں عام طور پر ایک طویل سائیکل کی ضرورت ہوتی ہے۔
2. روغن اور نیوکلک ایسڈ کی باقیات
بڑے پیمانے پر ابال بہت زیادہ مقدار میں روغن اور میزبان نیوکلک ایسڈ کی باقیات کو متعارف کرواتا ہے۔صاف کرنے کے سادہ عمل سے ان نجاستوں کو دور کرنا مشکل ہے، اور پیچیدہ طہارت لاگت کو بڑھاتی ہے اور بحالی کی شرح کو کم کرتی ہے۔
3. عدم استحکام
Proteinase K کافی مستحکم نہیں ہے، یہ خود کو انزائیمولائز کر سکتا ہے، اور حفاظتی ایجنٹ کے بغیر اسے لمبے عرصے تک 37°C پر مستحکم طور پر ذخیرہ کرنا مشکل ہے۔
4. تیز کرنا آسان ہے۔
پروٹینیز K کا منجمد خشک پاؤڈر تیار کرتے وقت، اس بات کو یقینی بنانے کے لیے کہ منجمد خشک پاؤڈر میں پروٹینیز K کا ٹھوس مواد زیادہ ہے، یہ ضروری ہے کہ زیادہ ارتکاز میں ایک منجمد خشک حفاظتی ایجنٹ شامل کیا جائے، لیکن جب پروٹینیز K کا ارتکاز 20mg/mL اور اس سے اوپر تک پہنچ جاتا ہے، یہ آسان ہے جمع ایک تیز رفتار بناتا ہے، جو کہ اعلی ٹھوس مواد کے ساتھ proteinase K کے منجمد خشک ہونے میں بڑی مشکلات لاتا ہے۔
5. بڑی سرمایہ کاری
Proteinase K میں پروٹیز کی مضبوط سرگرمی ہوتی ہے اور یہ لیبارٹری میں دوسرے پروٹیز کو ہائیڈولائز کر سکتا ہے۔لہٰذا، proteinase K کو تحقیق اور ترقی اور پیداوار کے لیے خصوصی پیداواری علاقوں، آلات اور عملے کی ضرورت ہوتی ہے۔
XD بائیوکیم کا پروٹینیز K محلول
XD BIOCHEM کے پاس ایک پختہ پروٹین ایکسپریشن اور پیوریفیکیشن پلیٹ فارم ہے، اور اسے دوبارہ پیدا ہونے والے پروٹینوں کے اظہار اور صاف کرنے اور پیداواری عمل کو بہتر بنانے کا بھرپور تجربہ ہے۔ایک تحقیقی اور ترقیاتی ٹیم کی تیزی سے تشکیل کے ذریعے، بڑے پیمانے پر پروٹینیس K کی پیداواری عمل پر قابو پا لیا گیا ہے۔منجمد خشک پاؤڈر کی ماہانہ پیداوار 30 کلو گرام سے زیادہ ہے۔پروڈکٹ میں مستحکم کارکردگی، اعلیٰ انزائم مخصوص سرگرمی، اور کوئی میزبان سائٹوکوم اور نیوکلک ایسڈ کی باقیات نہیں ہیں۔XD BIOCHEM سے رابطہ کرنے میں خوش آمدید ایک آزمائشی پیکج حاصل کریں (ای میل:sales@xdbiochem.comٹیلی فون: +86 513 81163739)۔
XD BIOCHEM کے تکنیکی حل شامل ہیں۔
ملٹی کاپی پلاسمڈ انٹیگریشن کا استعمال کرتے ہوئے، 8g/L کی ایکسپریشن لیول کے ساتھ ہائی ایکسپریشن اسٹرینز کا انتخاب کیا جاتا ہے، جو پروٹینیس K کے کم ایکسپریشن لیول کے مسئلے پر قابو پاتا ہے۔
ایک کثیر مرحلہ صاف کرنے کے عمل کے قیام کے ذریعے، پروٹینیس K کے میزبان سائٹوکوم اور نیوکلک ایسڈ کی باقیات کو کامیابی کے ساتھ معیاری قدر سے نیچے ہٹا دیا گیا۔
حفاظتی بفر فارمولیشنز کی ہائی تھرو پٹ اسکریننگ کے ذریعے، ایک بفر جو پروٹینیز K کو 37°C پر مستحکم طور پر ذخیرہ کر سکتا ہے منتخب کیا گیا۔
اسکریننگ بفرز اس مسئلے پر قابو پاتے ہیں کہ پروٹینیز K کو جمع کرنا آسان ہے اور زیادہ ارتکاز پر تیز ہونا، اور پروٹینیز K کے اعلی ٹھوس مواد کو منجمد خشک کرنے کی بنیاد رکھتا ہے۔
XD بائیوکیم پروٹینیز K کا نمونہ
XD BIOCHEM proteinase K استحکام ٹیسٹ: کمرے کے درجہ حرارت پر 80 d کے بعد سرگرمی میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آئے گی۔
XD BIOCHEM proteinase K استحکام ٹیسٹ: کمرے کے درجہ حرارت پر 80 d کے بعد سرگرمی میں کوئی خاص تبدیلی نہیں آئے گی۔
XD BIOCHEM proteinase K اور مسابقتی مصنوعات کے نیوکلک ایسڈ نکالنے کے اثر کا موازنہ۔نیوکلک ایسڈ نکالنے کے عمل میں، بالترتیب XD بایوکیم اور مسابقتی پروٹینیز K کا استعمال کیا جاتا ہے۔XD BIOCHEM proteinase K کی نکالنے کی کارکردگی زیادہ ہے اور ہدف جین کی Ct قدر کم ہے۔
پوسٹ ٹائم: دسمبر-31-2021