زیادہ سے زیادہ حراستی کا تعین کیسے کریں؟
inducer IPTG (isopropyl-beta-d-thiogalactoside) کے لیے، ارتکاز جتنا زیادہ ہوگا، اتنا ہی بہتر ہے۔زیادہ سے زیادہ ارتکاز کا انحصار مخصوص تجرباتی حالات اور مطلوبہ انڈکشن اثر پر ہوتا ہے۔
عام طور پر، IPTG کا ارتکاز 0.1-1 mM کی حد میں استعمال ہوتا ہے۔کم ارتکاز سیل کی نشوونما پر منفی اثرات کو کم کر سکتا ہے اور ٹارگٹ پروٹینز کے زیادہ اظہار کی وجہ سے سائٹوٹوکسیٹی کو کم کر سکتا ہے۔زیادہ ارتکاز سیل میٹابولک بوجھ کا سبب بن سکتا ہے، جس سے سیل کی نشوونما اور اظہار کی کارکردگی متاثر ہوتی ہے۔
زیادہ سے زیادہ ارتکاز کا تعین کرنے کا طریقہ مختلف ارتکاز پر IPTG انڈکشن ٹیسٹ کروا کر ہدف پروٹین کے اظہار کی سطح کا اندازہ لگا سکتا ہے۔چھوٹے پیمانے پر کلچر ٹیسٹ IPTG ارتکاز کی ایک رینج (مثلاً 0.1 mM، 0.5 mM، 1 mM وغیرہ) کا استعمال کرتے ہوئے کئے جا سکتے ہیں اور مختلف ارتکاز پر اظہار اثر کا اندازہ ہدف پروٹین کے اظہار کی سطح کا پتہ لگا کر کیا جا سکتا ہے (مثلاً مغربی دھبہ یا فلوروسینس کا پتہ لگانا)۔تجرباتی نتائج کے مطابق، بہترین اظہار اثر کے ساتھ ارتکاز کو بہترین ارتکاز کے طور پر منتخب کیا گیا۔
اس کے علاوہ، آپ متعلقہ لٹریچر یا دیگر لیبارٹریز کے تجربے کا بھی حوالہ دے سکتے ہیں تاکہ اسی طرح کے تجرباتی حالات میں عام طور پر استعمال ہونے والے IPTG ارتکاز کی حد کو سمجھ سکیں، اور پھر تجرباتی ضروریات کے مطابق اصلاح اور ایڈجسٹ کریں۔
یہ نوٹ کرنا ضروری ہے کہ زیادہ سے زیادہ ارتکاز مختلف ایکسپریشن سسٹمز، ٹارگٹ پروٹینز، اور تجرباتی حالات کے لحاظ سے مختلف ہو سکتا ہے، اس لیے ہر معاملے کی بنیاد پر اصلاح کرنا بہتر ہے۔
پوسٹ ٹائم: ستمبر-28-2023