4-Nitrophenyl beta-D-galactopyranoside CAS:200422-18-0

اثر: ONPG ایک سبسٹریٹ ہے جو خاص طور پر انزائم β-galactosidase کی موجودگی اور سرگرمی کا پتہ لگانے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔جب β-galactosidase enzyme موجود اور فعال ہوتا ہے، تو یہ ONPG کو دو مصنوعات میں تقسیم کرتا ہے: o-nitrophenol اور galactose derivative۔O-nitrophenol کی آزادی کے نتیجے میں پیلے رنگ کی تبدیلی ہوتی ہے، جسے سپیکٹرو فوٹومیٹر کے ذریعے ماپا جا سکتا ہے۔

درخواست: ONPG میں مالیکیولر بائیولوجی اور بائیو کیمسٹری ریسرچ میں کئی ایپلی کیشنز ہیں:

β-galactosidase سرگرمی کا تعین: ONPG عام طور پر β-galactosidase enzyme کی سرگرمی کی پیمائش اور مقدار درست کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔O-nitrophenol کی تشکیل کی شرح، جو کہ انزائم کی سرگرمی سے براہ راست متناسب ہے، کو spectrophotometrically ماپا جا سکتا ہے۔

جین ایکسپریشن اور ریگولیشن: ONPG کو اکثر جین ایکسپریشن اور ریگولیشن اسٹڈیز سے متعلق تجربات میں استعمال کیا جاتا ہے۔یہ اکثر فیوژن پروٹین اسسیس میں استعمال ہوتا ہے، جیسے کہ عام طور پر استعمال ہونے والا lacZ فیوژن سسٹم، مخصوص پروموٹرز کے کنٹرول میں جین کے اظہار کا مطالعہ کرنے کے لیے۔ONPG کا استعمال کرتے ہوئے ماپا بیٹا-galactosidase سرگرمی جین کے اظہار کی سطح کے بارے میں بصیرت فراہم کرتی ہے۔

β-galactosidase سرگرمی کے لیے اسکریننگ: ONPG کو ریکومبیننٹ DNA ٹیکنالوجی میں رنگین میٹرک اسکریننگ کے طریقہ کار کے طور پر LacZ جین کی موجودگی اور فعالیت کی نشاندہی کرنے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، جو β-galactosidase کو انکوڈ کرتا ہے۔اسکریننگ کا یہ طریقہ کلون کی شناخت میں مدد کرتا ہے جن میں دلچسپی کا جین ہوتا ہے۔

انزائم کائینیٹکس اسٹڈیز: ONPG β-galactosidase enzyme کے حرکیات کا مطالعہ کرنے میں بھی مفید ہے۔مختلف سبسٹریٹ ارتکاز میں انزائم-سبسٹریٹ کے رد عمل کی شرح کی پیمائش کرنے سے، یہ ممکن ہے کہ حرکیاتی پیرامیٹرز کا تعین کیا جا سکے جیسے Michaelis-Menten constants (Km) اور زیادہ سے زیادہ رد عمل کی شرح (Vmax)۔